精制抗蛇毒血清制造及检定规程

　　本品系蛇毒或脱毒蛇毒免疫马的血浆，经胃酶消化后用硫酸铵盐析法制成的抗蛇毒球蛋白制剂，能中和相应蛇毒，用于治疗被相应毒蛇咬伤之患者。

　　1 制造

　　1.1 对血浆的要求

　　1.1.1 用于制造精制抗蛇毒血清的血浆应符合附录1《抗蛇毒血清生产用马匹免疫方法》的规定。

　　1.1.2对血浆效价的最低要求如下：

　　1.2 制造程序

　　按《精制抗毒素制造及检定规程》中1.2项进行。

　　1.3 对制造工艺的要求及规定

　　按《精制抗毒素制造及检定规程》中1.3项进行。

　　1.4 半成品检定

　　由制造部位进行理化检定、无菌试验、安全试验、热原质试验、类A血型物质测定及效力试验。热原质试验、类A血型物质测定及效力试验可与质量检定部门会同进行。检定方法及要求同成品检定。

　　2 成品检定

　　由质量检定部门进行全面检定，半成品已会同检定的项目可抽检。

　　2.1 鉴别试验

　　按《精制抗毒素制造及检定规程》2.1项进行。

　　2.2 理化检定

　　按《精制抗毒素制造及检定规程》中2.2项进行

　　2.3 无菌试验

　　按《生物制品无菌试验规程》进行。

　　2.4 安全试验

　　按《精制抗毒素制造及检定规程》2.4项进行。

　　2.5 热原质试验

　　按《生物制品热原质试验规程》进行。注射剂量为3ml/kg。判定标准按该规程4.1项要求进行。

　　2.6 类A血型物质测定

　　按《精制抗毒素制造及检定规程》2.6项进行。

　　2.7 效价测定

　　2.7.1 效价测定方法见附录2。

　　2.7.2对各种抗蛇毒血清成品的最低效价要求如下：

　　3 保存与效期

　　保存在2～8℃。自效价测定合格之日起，液体血清效期为3年，冻干血清效期为5年。

　　附录1 抗蛇毒血清生产用马匹免疫方法

　　1 马匹

　　1.1 用于免疫采血之马匹必须符合《生物制品生产用马匹检疫及管理规程》的规定。

　　1.2 马匹开始免疫前可做破伤风预防注射。

　　1.3抗蛇毒血清生产用马匹，如解剖确诊为蛇毒中毒死亡者，应将尸体焚毁或深埋。

　　2 抗原与佐剂

　　2.1 免疫用蛇毒抗原选用蛇毒或脱毒蛇毒。

　　2.2 用作免疫之蛇毒毒素必须经除菌处理。

　　2.3 蛇毒应于2～8℃真空干燥保存。免疫抗原为配制稀释成一定浓度的蛇毒液。

　　2.4凡接触蛇毒之用具，用前用后都应煮沸消毒，手有创伤者，操作时应有保护措施。

　　2.5 免疫用佐剂应符合《精制抗毒素制造及检定规程》附录1中的有关要求。

　　3 免疫与采血

　　3.1 马匹免疫采血按《抗毒素生产马匹免疫方法》中的要求及规定进行。

　　3.2 基础免疫、超免疫

　　根据基础免疫情况，制定超免疫计划。免疫注射量应逐渐递增，可视注射反应而定。

　　3.3 采血

　　经试血效力试验合格之马匹可进行采血，其血清的效价不得低于下列要求。分离之血浆加适宜防腐剂（如0.5%苯酚）。

　　4 效价测定

　　效价测定方法见附录2。

　　附录2 抗蛇毒血清效价测定方法（小白鼠试验法）

　　1 试剂

　　1.1 标准抗蛇毒血清

　　由中国药品生物制品检定所分发。标准抗蛇毒血清应保存于2～8℃。

　　1.2 蛇毒

　　由检定所分发。试验用的蛇毒须以检定所分发的标准抗蛇毒血清准确标定其试验量（蝮蛇、眼镜蛇及银环蛇1个L+，五步蛇2个L+）。使用干毒时，须以精确的分析天平称取，每次称取量不得少于5mg，溶解后应在3天内（保存于2～8℃）用完。干毒应封存于装有干燥剂的真空器皿中。亦可将干毒制成液体甘油蛇毒，即干毒溶解液与中性甘油（经116℃10分钟灭菌）等量混合，每ml至少含50个试验量，保存于2～8℃暗处。

　　1.3 稀释液

　　硼酸盐缓冲盐水，灭菌后pH应为7.0～7.4。配方为：

　　氯化钠8.5g

　　硼酸 4.5g

　　硼砂0.5g

　　加蒸馏水至1000ml，过滤。

　　2 用具

　　吸管、容量瓶、注射器应经标化。吸管、试管、容量瓶应洁净干燥，其他用具应灭菌。

　　3 试验动物

　　体重18～20g健康小白鼠。

　　4 试验方法

　　4.1 稀释标准抗蛇毒血清

　　用稀释液稀释标准抗蛇毒血清使每ml含抗银环蛇、眼镜蛇或抗蝮蛇毒血清5U、或抗五步蛇毒血清10U，即与5个相应蛇毒试验量混合后每0.4ml注射量中含1U或2U。

　　4.2 稀释蛇毒

　　用稀释液稀释蛇毒，使其5个试验量不超过0.8ml，在与抗蛇毒血清混合时补加稀释液至2ml，即每0.4ml注射量中含1个试验量。

　　4.3 稀释待检抗蛇毒血清

　　用稀释液将待检抭蛇毒清稀释成数个稀释度，使每ml抗蝮蛇、眼镜蛇或银环蛇毒血清约含5U或其上下：抗五步蛇毒血清约含10U或其上下。各稀释度间隔5%～10%。

　　4.4 混合

　　4.4.1 待检组

　　定量吸取不同稀释度之待检抗蛇毒血清各1ml，分别装入小试管中，每管加入5个试验量与待检抗蛇毒血清相应的稀释蛇毒液，补加稀释液至2ml，混合均匀，加塞，置37℃结合45分钟后立即注射小白鼠。

　　4.4.2 对照组

　　按下表定量吸取已稀释之待检抗蛇毒血清相应的标准抗蛇毒血清，分别装入小试管中：

　　对照①
　　对照②

　　标准抗眼镜蛇毒血清 1ml 1.2ml

　　每管加入5个试验量之相应稀释蛇毒液，补加稀释液至2ml，混合均匀，加塞，置37℃结合45分钟后立即注射小白鼠。

　　4.5 注射

　　每个稀释度的待检抗蛇毒血清、对照①及对照②各注射小白习4只，每只腹腔注射0.4ml。应注意勿使注射液流出。

　　4.6 观察

　　试验小白鼠每日观察1次，并记录发病及死亡情况，抗银环蛇毒血清及抗五步蛇毒血清之试验小白鼠观察48小时，抗腹蛇毒血清及抗眼镜蛇毒血清之试验小白鼠观察72小时。

　　4.7 结果判定

　　对照①小白鼠死亡50%以上，对照②小白鼠应比对照①死亡晚或不死亡。待检抗蛇毒血清之效价应以与对照①小白鼠同时死亡之最高稀释度判定。

精制抗蛇毒血清使用说明书

　　本品系用蛇毒免疫马匹后由马血浆精制而成，供治疗蛇咬伤者之用，其中蝮蛇抗血清对竹叶青和烙铁头咬伤亦有疗效。咬伤后，应迅速注射本品，愈早愈好。

　　本品为无色或淡黄色的澄明液体，含防腐剂，久置可析出少量能摇散的沉淀。

　　用法

　　1.注射途径：通常采用静脉注射，也可做肌内或皮下注射。

　　2.剂量：一般蝮蛇咬伤注射抗蝮蛇毒血清6000U；五步蛇咬伤注射抗五步蛇毒血清8000U；银环蛇或眼镜蛇咬伤注射抗银环蛇毒血清10000U或抗眼镜蛇毒血清2000U。以上剂量约可中和一条相应蛇的排毒量。视病情可酌量增减。

　　3.儿童用量应与成人相等，不应减少。

　　4.注射前必须先做过敏试验，阴性者才可全量注射。

　　过敏试验方法

　　取0.1ml抗血清加1.9ml氯化钠注射液，好20倍稀释。在前臂掌侧皮内注射0.1ml，经20～30分钟，注射部位皮丘在2cm以内，且皮丘周围无红晕及蜘蛛足者为阴性，可直接注射。若阳性可疑者，预先注射扑尔敏10mg（儿童剂量根据体重酌减），15分钟后再注射本品。若阳性者应采用脱敏注射法。

　　脱敏注射法

　　用氯化钠注射液将抗血清稀释20倍。分数次做皮下注射，每次观察10～20分钟，第1次注射0.4ml。如无反应，可酌情增量注射。注射观察3次以上，无异常反应者，即可做静脉、肌内或皮下注射。注射前将制品在37℃水浴加温数分钟。注射时速度应慢，开始每分钟不超过1ml，以后亦不宜超过4ml。注射时，如有异常反应，应立即停止注射。

　　注意事项

　　1.遇有血清过敏反应，即肌内注射扑尔敏。必要时，应用地塞米松5mg加入25%（或50%）葡萄糖注射液20ml中静脉注射或氢化可的松琥珀酸钠135mg或氢化可的松100mg加入25%（或50%）葡萄糖注射液40ml中静脉注射，亦可静脉滴注。

　　2.对咬伤者不论是否毒蛇咬伤，遇有伤口污染较明显者，应同时注射破伤风抗毒素1500～3000U。

　　保存

　　保存于2～8℃暗处。