第二十章　临床生物化学方法的选择、建立和评价

　　临床生化方法的选择、建立和评价，是临床生化质量控制的重要基础工作，它们之间的关系可用图20-1表示。

　　本章内容主要指光谱分析方法的选择、建立和评价，对其它分析方法也有参考价值。其中所述评价系统适用于常规分析方法的评价，在评价试剂盒时也可供参考。

图20-1　方法选择、建立与评价之间的关系

第一节　临床生化方法的选择

　　一、方法和标准品的分级

　　（一）方法的分级

　　临床生化成分的测定方法很多，根据其准确度与精密度的不同可以分为三级。

　　⒈决定性方法（definitive method）是指准确度最高，系统误差最小，经过详细的研究，没有发现产生误差的原因或在某些方面不够明确的方法，测定结果为“确定值”，与“真值”最接近。由于技术要求太高，费用昂贵，不直接用于鉴定常规方法的准确性，只用于发展及评价参考方法和标准品。

　　⒉参考方法（reference method）是指准确度与精密度已经充分证实的分析方法，干扰因素少，系统误差很小，与重复测定的随机误差相比可以忽略不计，有适当的灵敏度、特异性、直线性及较宽的分析范围。这类方法应在条件优越的实验室中应经常使用。但它主要应用于鉴定常规方法，评价其误差大小，干扰因素，并决定其是否可以被接受。它也用于鉴定二级标准品，为质控血清定值，也可用于评价商品试剂盒等。

　　⒊常规方法（routine method）常规方法的性能指标符合临床或其它目的需要，有适当的分析范围，而且经济实用。所谓偏差已知的方法是指准确度已经确定的方法，其准确度不明者称为偏差未知的方法。常规方法在作出评价以后，经有关学术组织认可，可以作为推荐方法。

　　临床化学方法之间关系可见图20-2。

图20-2　临床化学方法的关系图

　　（二）标准品的分级

　　国际标准化委员会将标准品（参考物）的定义暂定为：它的一种或几种物理或化学性质已经充分确定，被用于校正仪器或证实一种测定方法的物质，并将其分成三级。

　　⒈一级标准品一级标准品（原级参考物）是已经确定的稳定而均一的物质，它的数值已由决定性方法确定，或由高度准确的若干方法确定，所含杂质也已经定量。它可用于校正决定性方法，评价及校正参考方法以及为“二级标准品”定值。一级标准品都有证书，在美国由国家标准局（NBS）发给合格证书，并指明它的性质和有关数据。

　　⒉二级标准品二级标准品（次级标准品）或是纯溶液（水或有机溶剂的溶液），或存在于相似基质中。这类标准品可由实验室自己配制或为商品，其中有关物质的量由参考方法定值或用一级标准品比较而确定，主要用于常规方法的标化或为控制物定值。

　　⒊控制物控制物有冻干的或溶液，可以用适当的标准品（一级或二级）以参考方法定值，用于质量控制，不用于标化（除经准确定值者）。

　　二、方法选择的要求

　　国际临床化学协会（IFCC）提出：常规方法应具有实用性和可靠性两方面的性能指标，至于某一项具体分析方法所应具有的性能标准，可由临床化学家根据采用这一试验的目的决定。

　　（一）实用性

　　一般应具备：①微量快速能便于急诊，适合成套项目分析。②费用低廉，包括劳动力与试剂、设备及一般管理费用等。③方法简便。④应用安全可靠。

　　（二）可靠性

　　一般具有较高的精密度和准确度，以及较大的检测能力。①精密度，变异系数（CV％）一般应小于5％。②准确度与特异性，准确度是指测定值与“真值”的符合程度。一般偏差系数（CB）应小于5％。特异性是指只对待测物质起化学反应，不与其它结构类似的化合物发生反应。③检测能力，即“检测限度”，或“检出限”。检出限通常是指能与适当的“空白”读数相区别的待测物的最小值。

　　三、方法选择的步骤

　　（一）广泛查阅文献

　　根据方法选择的要求对已发表的各种方法进行比较与检验，确定哪些方法有充分的科学根据及真实的使用价值。必须仔细分析各种方法的特点，选择适合于本实验室具体条件的方法，并且要判断所选方法能否满足本室工作的需要。如果文章中没有写上方法的有关性能资料或引用文献中的有关论述，则不应轻易采用。

　　（二）选定候选方法

　　经初步选定的方法称为候选方法。候选方法确定后，应该写出该法的原理与参考文献，所用仪器、试剂的来源、牌号、纯度（或配套试剂盒），标本收集要求，详细的操作步骤，标准曲线和结果计算，文献中列出的性能指标，参考值与参考范围，以及其它应注意的事项与安全防护措施等。

　　（三）进行初步试验

　　为了实用的目的，初试应该包括①标准曲线及其重复性；②质控血清或新鲜标本的重复试验；③分析待测物浓度不同的标本，与公认的参考方法的测定值作对比；④要有足够的试验证明仪器与试剂能符合要求。这些初试工作有希望揭露明显的问题。例如未曾预料的困难或误差来源等。初试的特殊目的是使分析工作者熟悉有关技术；掌握各分析步骤的特性；操作是否可以改进或简化；初试所得到的一切资料用于确定是否有必要作进一步研究，如需要和技术上的某些修改，应在评价实验之前作好。