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第三节 基因序列的突变分析

  目前对于基因序列的突变分析国内外多采用直接测序方法,直观又准确。例如,1996年Sakai等报道了对高α脂蛋白血症患者CETP基因内含子10和内含子14片段序列的突变分析。其方法为:采取患者全血根据Kunkel等方法准备基因DNA;CETP基因内含子10的splice donor位点的PCR扩增引物为:5'-CCCTGCGAATTCTTCTTCTGAGGAGTGGAC-3’和5'-ATAATTGCATCCATTGGTGGTGTTSTTGGC-3’,内含子14的splice donor位点的PCR扩增引物为:5’-CTTCTGTGCTCCAGGGAGGACTCACCATGG-3’和5’-GGCACCCAGTTTCCCCTCCAGCCCACACAT-3’其中分别含有用于克隆的EcorI和BamHI酶切后,亚克隆人Bluescriptll KS(一)中;最后根据Sanger双脱氧核苷酸终点法测定DNA序列。

(章晓联)

  参考文献

  1.(美)J萨拇布鲁克,EF弗里奇,T曼尼阿蒂斯著,金科雁,黎孟枫等译,分子克隆实验指南,第二版,北京:科学出版社。1992

  2.Th Kohler ,D Labner,AK Rost ,et al.Quantiattion of mRNA by Polymerase Chain Reaction (Nonradioactive PCRMethods ),Springer Lab Manual,1995

  3.Naohiko Sakai,Silvia Santamarina-fojo Shiauya Yamashita,et al.Exon 10 skipping caused by intron 10 splice donor site mutation in cholesteryl ester transfer protein gene results in abnormal dowstream splice site selection.Journal of Lipid Research,1996 Vol137:2065-2070

  4.王林芳,潘华珍主编,分子生物学基本技术,北京,北京生理科学会,1991

  5.Lawrence Akaplan ,Amadeo Jpesce,Clinical Chemistry.Theory anslysis and correlation(Third Editim)Mosby,1996