第四节　免疫活性细胞及其肿瘤的免疫细胞学

　　免疫活性细胞组成人体免疫系统组织、器官，是维持人体内外环境稳定，消除体内外抗原性物质之危害，起着免疫监视作用，是当代重视和研究地十分深入的领域。免疫活性细胞主要包括淋巴细胞、单核/巨噬细胞及网状细胞等。它们产生的肿瘤—恶性淋巴瘤，是预后差的一类肿瘤，其形态与分型十分复杂。由于淋巴网状组织学及功能的特殊性等因各种抗原性刺激而引起的淋巴网状组织反应性增生（Reactive Hyperplasia, RH）、改变复杂，其与恶性淋巴瘤在组织学方面鉴别很困难，误诊率可达10%～30%，是临床病理诊断中的难题。由于免疫细胞化学，分子生物学的发展，已有可能利用单克隆抗体（McAb）或多克隆抗体（PcAb）和IgH,TCR（T细胞受体）基因重排检测技术，将免疫活性细胞及其肿瘤细胞的细胞系及分化期、亚型、淋巴瘤良、恶性进行鉴别诊断。免疫细胞化学技术简单易行，具有一定的特异性。且可在组织原位标记。并可用于印片或细胞悬液，配合流式细胞仪，提供更为精细的信息。目前市场供应的McAb 与PcAb可已有百种。国际统一称之为CD系列。已往还有OKT系列和Leu系列。但仍有不足的一面，所有抗体在特异性，表达率均有不足。而且在良、恶性的鉴别作用更是有限。

　　一、免疫活性细胞的免疫细胞化学

　　（一）B淋巴细胞

　　B淋巴细胞从骨髓干细胞到分化成熟称为非抗原依赖期。成熟B小淋巴细胞受到抗原刺激后可产生增殖衍化，演变成浆细胞合成分泌Ig。B淋巴细胞存在细胞表面Ig(SIg)及细胞内Ig(CIg)。人们利用SIg 与CIg作为抗原制成许多标记抗体。SIg标记只存在于次成熟的转化淋巴细胞。且多数为IgM·G，而幼稚的前B淋巴细胞与浆细胞缺乏SIg标记。目前较常用的SIg标记McAb有CD₁₉，CD₂₀，CD₂₂，需冰冻切处新鲜组织，而L₂₆则可用于石蜡切片。后又增加LN—1，LN-2，LN-3，MB-1，MB-2及4KB₅等石蜡切片标记抗体。称它们为全B抗体。

　　Cig可分Ig重链包括IgM、Igg IgA、IgD、IgE5种，轻链λ、k两种，CIg标记抗体表达在愈成熟的B淋巴细胞，幼稚者则阴性。在不同部位组织其表达也不一致。如淋巴结生发中心B细胞表达IgD，而肠粘膜淋巴组织中的生发中心B淋巴细胞则表达IgA。上述IgH、L抗体在一些因素的影响下，真正表达率只有75%左右，而且如巨噬组织、R-S细胞等可以吸收血浆中的Ig而出现假阳性。

　　表12-2 介绍了淋巴细胞分化各阶段的部位、免疫表型和相关肿瘤，请参阅。

表12-2　　B淋巴细胞分化各阶段细胞的部位、免疫表型和相关肿瘤

　　（二）T淋巴细胞

　　由于T细胞表面存在羊红细胞受体（E-R），人们利用T细胞受体作抗原制成多种McAb，如CD₂，T₁₁，OKT₁₁，Leu₅等。发育不同阶段的T细胞ER数量及亲和力不同。未分化T细胞与前T细胞缺乏ER，但它可用TdT抗体标记。T淋巴细胞又分辅助T/诱导（T_H/T₁）志抑制T/毒性T（T_S/T_K）两大亚型。T_H标记抗体有CD₄等，T_S标记抗体有CD₈。上述几种抗体要新鲜组织冰冻切片。一般难于广泛使用。最近制出UCHL-1，MT-1Leu₂₂(L₆₀)等石蜡切片全T性标记抗体，其中UCHL-1已被广泛采用。新近又推出A₆，MCA₆，比UCHL-1效果要好。OPD₄可用于石蜡切片T_H标记。CD₅，CD₆等McAb特异性不足，可以标记少数B淋巴细胞，粒细胞等。

　　表12-3 介绍了T淋巴细胞分布及各阶段细胞的部位、免疫表型和相关肿瘤，请参阅。

表12-3 T淋巴细胞分化各阶段细胞的部位、免疫表型和相关肿瘤

　　表12-2、12-3引自全国第六届淋巴瘤学术会议论文汇编，恶性淋巴溜和白血病的免疫组织化学（综述）上海肿瘤医院，朱雄增。

　　（三）NK细胞/K细胞

　　目前认为NK细胞是一种自然杀伤细胞，它杀伤特异性细胞，事先无需致敏，亦无MHC限制的淋巴细胞。K细胞是指能介导ADCC（抗体依赖性毒性淋巴细胞）。过去曾认为NK细胞是胞浆中含有粗大溶酶体的颗粒性大细胞。现已证明它在分化成熟后才有这一特征。它的表面有高亲和力的IL-2受体，在IL-2刺激下可以增殖和表达细胞毒性。活性后的NK细胞还可表达HLA-DR抗原。NK细胞的标记特点是CD₅₆，CD₂ER，Igg FcR/C₃R均阳性表达，而CD₃，CD₇，CD₁₉阴性表达。后发现CD₅₇，CD₅₆也是较特异性McAb。对K细胞与NK细胞之间的关系尚有不同意见，但多数认为二者系由同一细胞介导。

　　（四）单核/巨噬细胞与网状细胞

　　单核/巨噬细胞不仅参与抗原的提呈和免疫调节　，而且是具有特异和非特异吞噬异物功能的免疫活性细胞。单核细胞起源于骨髓干细胞，进入血流，当它到达组织则称组织细胞。在出现吞噬时则称巨噬细胞。它分布于不同组织，如枯否氏细胞，肺泡巨噬细胞，腹腔巨噬细胞，脑小胶质细胞，甚至破骨细胞等，这类细胞统称为单核/巨噬细胞系统。不同组织的巨噬细胞其生物学特性亦有差异。应用的标记抗体有抗溶菌酶（lys），抗α₁-胰蛋白酶（AAT），抗α₁-糜蛋白酶（ACT）抗体均可用于石蜡切片标记。其中lys抗体反应较弱，敏感度不足。新近又推出Mac387,KP1标记抗体、效果十分满意。另外还有CD₁₁₆，CD₆₄，CD₃₂等FCR抗体，需冰冻切片。

　　网状细胞，过去认为它是组织细胞同类细胞。但已证明它是固定于淋巴网状组织的一类无吞噬功能，但可传递抗原信息、调节　免疫功能。其细胞发生尚有争议。其中包括生发中心树突网状细胞（DRC），指突状网状细胞（IRC），在髓质淋巴窦附近的纤维母细胞网状细胞以及主要分布在皮肤表皮的朗格罕氏细胞（Langerhan’s cell）等。这类细胞均有类似巨噬细胞的HLA-DR抗原表达，但较弱。它们可对S—100蛋白阳性表达，是与巨噬细胞不同之点。

　　二、恶性淋巴瘤的免疫细胞化学标记

　　恶性淋巴瘤总的可分为非何杰金淋巴瘤（NHL）与何杰金氏病两大部分。NHL的免疫功能分类繁多。总体上各类型的瘤细胞的免疫细胞化学标记与相应的正常细胞标记相一致。但是由于瘤细胞的基因有变异，分化不正常，其抗原性也发生变化。因此瘤细胞比相应正常细胞的表达要弱或丧失。在此不分型描述，而从应用角度分为下列三方面进行讨论：

　　（一）恶性淋巴瘤与淋巴网状组织反应性增生的鉴别诊断

　　组织学鉴别，在早期滤泡内型滤泡型淋巴瘤与淋巴滤泡瘤样增生、高分化的NHL与RH及假阳性淋巴瘤鉴别方面存在相当的困难。必需借于其他有效技术方法。但免疫细胞化学标记有一定限制性。其中B淋巴瘤与RH鉴别中可以应用IgH和或Igl 标记，及有75%左右的恶性淋巴瘤为IgH和/或IgL单项阳性，即为单克隆性增生，相反如为2项以上阳性为多克隆性RH，但有时少数淋巴瘤可出现双克隆性，这方面应严格排除其他因素引起的假阳性和假阴性，故仍需紧密结合组织学改变。T淋巴瘤则缺乏单克隆性标记抗体，在应用全T性抗体标记出现单一性或高度优势标记，再结合组织学改变可以辅助识别良、恶性。新近报告富于T细胞的B淋巴瘤或富于B细胞的T淋巴瘤（在瘤细胞间伴有大量反应性成熟T或B淋巴细胞），这与良性反应性增生更为困难。若瘤细胞体积增大，出现T或B单一性标记，而反应性淋巴细胞呈现T、B及组织细胞混杂标记，则有助于良恶性炎鉴别，另外可加用PCNA（增殖细胞核抗原）或Ki—67标记，则瘤细胞一般为阳性。

　　（二）恶性淋巴瘤与非淋巴瘤网状组织肿瘤的鉴别

　　目前有较多的报告淋巴结外组织未分小细胞癌或网瘤，常规切片很难与恶性淋巴瘤区别，小细胞肉瘤有胚胎性横纹肌肉瘤、外周性神经母细胞瘤，Ewing’s肉瘤，Merkel细胞癌以及无色素性恶性黑色素瘤。应用免疫组化有较好的鉴别作用。首先应根据HE组织学改变，一般特殊组织化学染色初步确定某一类肿瘤的可能。再从总体上先作LCA（白细胞共同抗原）与EMA（上皮膜抗原）免疫细胞化学标记。确定是淋巴瘤还是未分瘤。如果两者均阴性则应加作其他淋巴瘤抗体标记。因为LCA抗体在浆细胞瘤，T淋巴母细胞淋巴瘤及何杰金氏病R—R细胞不表达。上述标记全阴性，则应作Vimentin标记，如为阳性，则为间叶组织源。再用肌球蛋白标记阳性为胚胎性横纹肌肉瘤。作糖元染色阳性为Ewing肉瘤，NSE阳性为Merkel细胞或肺小细胞癌，S—100阳性为神经母细胞瘤。

　　（三）恶性淋巴瘤的免疫细胞分型

　　淋巴瘤分型对病人预后的估计，临床治疗有指导性意义。但这不如良恶性鉴别重要。在日常外检中进行淋巴瘤分型，应挑选针对性强、特异性高、使用方便的标记抗体。如有条件的单位以新鲜组织冰冻切片标记、阳性率高。一般单位病理科则选用石蜡切片标记抗体。目前比较常用而效果稳定的石蜡切片标记抗体有L₂₆（全B，除浆细胞瘤）UCL1（全T ）KP1或Mac387组织细胞标记。T淋巴瘤应用CD₄与CD₈标记区别辅助T或抑制T。

　　以上为NHL标记分型。关于HD的R-S细胞标记。R—s 细胞的发生组织细胞至今尚未完全肯定、R—S细胞标记抗体最先应用LeuM₁(CD₁₅)抗体，它对HD—LPL—H型R—S细胞不标记。且对粒细胞、T细胞、单核/巨噬细胞，甚至上皮细胞也阳性。最近由体外培养的R—S细胞提取抗原制成的Ki-1McAb、对所有类型的R—S细胞均为阳性表达。但对活化的T或B淋巴细胞亦阳性。且需作冰冻切片染色。而可在石蜡切片表达的Ber—H₂抗体问世，就解决了困难问题。

　　（四）在恶性淋巴瘤免疫表型分析中的注意事项

　　为了正确应用免疫细胞化学标记手段在恶性淋巴瘤诊断，分型等方面发挥更大的作用应注意下列问题：①免疫细胞化学在恶性淋巴瘤分析中应紧密结合组织学改变，有目的地选用高效、广谱的抗体，淋巴瘤常用标记抗体见表12-4。因为免疫细胞化学的结果受到多种因素的影响，可以出现假阳性或假阴性；②为了避免因抗体标记的局限性而造成漏诊，有条件的单位最好一次用同功能的几种抗体，这样可以起来抗体间的反应互补性，往往比单项抗体的标记率高；③标本固定要及时，应用中性福尔马林液或B₅固定液，则抗原保存要好一些。尽可能应用低压，低温（60^℃以下）浸蜡，减少抗原的破坏丢失；④抗体的浓度要适当，消除背景染色。加用二甲砷酸钠可除去背景着色。特别膜标记阳性时与背景着色很难区分。前者包绕细胞呈环状；⑤每次染色应有阳性对照和阴性对照；⑥目前淋巴瘤的基因重排检测技术已经建立。特别是多聚酶链反应（PCR）扩增技术的应用，提供了特异（无假阳性），敏感（可检测出1/100万瘤细胞）快速（当天可出报告）的淋巴瘤检测手段。作者科室已建立了该项技术。虽然其设备条件要求比较高。可作为疑难、早期、化疗后残留病灶病例的确诊。

表12-4 淋巴瘤常用标记抗体

　　※可用石蜡切片标记的McAb

(朱梅刚)