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第四章 免疫酶细胞化学

  免疫酶细胞化学是免疫细胞化学(Immunocytochemistry,ICC)中最常用的方法之一,它是在抗原抗体特异反应存在的前提条件下,借助于酶细胞化学的手段,检测某种物质(抗原/抗体)在组织细胞内存在部位的一门新技术:即预先将抗体与酶连结,再使其与组织内特异抗原反应,经细胞化学染色后,于光镜或电子显微镜下观察分析的形态学研究方法。

  40多年前,Coons及其同事利用荧光色素(FITC)标记抗体而开创的免疫荧光抗体技术,具有一定的灵敏性、特异性、操作简单等优点,但亦存在抗体用量大,标本不能长期保存、需较昂贵的荧光显微镜等问题。几乎在同一时期,电子显微镜在医学生物学领域中得到了广泛的应用。为克服荧光抗体法的不足、并能在超微结构水平定位抗原物质的存在部位,Nakane(1966)等成功地引入了酶代替荧光色素标记抗体,进行组织细胞内抗原或半抗原的定位,开辟了酶标抗体技术免疫酶细胞化学之路。

  Sternberger(1970)等人在此基础上又作了改良,建立了非标记抗体酶法以及PAP法。酶标抗体法确立至今已经27个春秋,不断发展、成熟。各种新技术的引入,使新抗体相继问世,应运而生的抗体制造、经销商遍布世界各地,使ICC技术得到了更广泛的推广和应用,成为当今形态学研究领域中不可缺少的手段;同时也有为临床病理诊断、肿瘤性质的判定、预后的估测等提供重要依据,是临床实验室常规检查法之一。近年,伴随分子生物学、分子遗传学的惊人进步,ICC技术在基因表达产物的观察,细胞功能动态分析中,亦发挥着重要作用。在此,结合,笔者经验,介绍ICC染色中的主要程序:组织标本的固定、切片、染色原理及步骤、结果判定及一些进展、特殊应用等供读者参考。